检测量具:β-葡萄糖苷酶活性测定

云梦县怀薇温度检测有限公司 关于我们 2020-06-05 13:22:34 0 葡萄糖  be  测定  活性  
β-葡萄糖苷酶活性测定

β-葡萄糖苷酶活性的测定方法

目前对于β-葡萄糖苷酶活性的测定方法很多,概括起来主要有电化法,荧光法,分光光度法等.

1)Barush和Swiain法,也就是分光光度法:它以水杨苷做底物,将水杨苷裂解为水杨醇和葡萄糖,然后将酶解产物中的水杨醇用4-氨基安替比林显色,再用分光光度法比色测定;也可用熊果苷作为底物,对产生的葡萄糖可用碘量法加以测定。

2)荧光法;用4-甲基伞形酮β-D-葡萄糖苷作为底物,经β-葡萄糖苷酶作用,专一地分解为4-甲基伞形酮,利用伞形酮与4-甲基伞形酮具强烈荧光特点,通过测定酶解有力出的4-甲基伞形酮的荧光的特点,通过测定酶解游离出的4-甲基伞形酮的荧光吸光度计算酶的活性。

3)比色法,以对小鸡苯基β-D-葡萄糖苷作为底物进行酶解,底物水解后释放出来的对硝基苯酚在400-420nm可见光范围内有特征吸收峰,可直接在400-420nm之间比色测定。

4)梁华正等人研究了以京尼平苷为底物检测β—葡萄糖苷酶活性的一种新方法。京尼平苷经β-葡萄糖苷酶水解后产生京尼平,京尼平能与氨基酸反应生成稳定的蓝色,在590nm处有特征吸收峰。β-葡萄糖苷酶活力在0.0-1U/ml范围里呈线型关系,最低检出限为0.02U/ml。

另外还有电化法,该方法是以扁桃苷作为底物,根据所产生的氢化物,用于自发(内)电解池相联结的一对银-铂电极的方法来测定其β-葡萄糖苷酶活性。

以水杨苷酶反应底物的Barush和Swiain法检测的是经β-葡萄糖苷酶水解底物产生的极微量的葡萄糖,反应易受干扰,且检测灵敏度不高。荧光法最初用于酶含量低的高等动物组织中的β葡萄糖苷酶的检测,灵敏度高且快速,但是由于实验过程操作复杂,且重复性不好,现在应用不多。以对硝基本机-β-D葡萄糖苷为酶底物的比色法最为普遍,且在实验中该方法操作简单,快速,灵敏度高重现性好。以京尼平苷为底物检测β-葡萄糖苷酶活性的方法与pNPG法相比,灵敏度低,但是精密度和准确度较好,结果稳定。

参考文献:李华.高丽 β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究[N].食品与生物技术学报.2007年3月(第26卷第2期)

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